Hibridación fluorescente in situ

  FISH o hibridación fluorescente in situ es una técnica de tinción de cromosomas en la que se provoca que los cromosomas específicos brillen bajo el microscopio. Esta técnica permite la rápida determinación de aneuploidía, la ausencia del cromosoma completo o la presencia de un cromosoma adicional, así como la adjudicación de un marcador genético a un cromosoma (cartografía genética).

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Los cromosomas que son usualmente utilizados con FISH son los 13, 18, 21, X e Y; sin embargo, como son posibles tinciones adicionales del cromosoma, otros cromosomas pueden ser visualizados con esta técnica. FISH usa segmentos de una única hebra de ADN que son tintados, o etiquetados, con una sustancia fluorescente que puede ligarse a un cromosoma específico; estos segmentos de ADN son llamados pruebas.

El primer paso de la técnica consiste en la desnaturalización del DNA para separar la dole hélice. A la muestra desnaturalizada se le añade entonces la sonda de interés (fragmento de ADN marcado fluorescentemente). Primero, las sondas hibridan a regiones específicas. Después, se tiñen los núcleos con un color de contraste inespecífico (generalmente DAPI). Las sondas de DNA pueden marcarse con moléculas fluorescentes (método directo) o no fluorescentes que se detectan con anticuerpos fluorescentes (método indirecto).

La técnica FISH puede realizarse a los cromosomas en metafase o en interfase.   En metafase se utiliza para detectar microdeleciones específicas, translocaciones o para identificar material extra de origen desconocido. Los tipos de sondas usadas son cósmidos,satélites alfas y sondas completas (painting probes). Los cósmidos son secuencias únicas que hibridan con fragmentos pequeños. Se emplean en estudios de microdeleciones. Las sondas satélites están formadas por secuencias altamente repetidas que se encuentran cerca de lo centrómeros. En la mayoría de los casos son específicas de cada cromosoma. Se unan para determinar aneuploidias o para identificar el origen de cromosomas marcadores.

No siempre es posible tener núcleos fijados en inerfase para realizar el FISH. Normalmente, cuando se fija una célula sin tratar el núcleo se encuentra en interfase, con los cromosomas descondensados. A pesar de ello, es posible relizar el FISH aunque los resultados obtenidos no sean tan específicos. Se emplea sobre todo para la detección de aneuploidias o grandes delecciones, duplicaciones o translocaciones en células fetales o tumorales.

Además del FISH múltiple, está el FISH en hebra y el FISH inverso.

Múltiple FISH

M-FISH es una adaptación del FISH que permite la visualización de los 22 autosomas humanos y los dos cromosomas sexuales en 24 (o más) colores diferentes, de manera que cada cromosoma será identificable por su propio color. El poder de dicho método reside en su habilidad para:

• determinar rápidamente si hay algún cromosoma extra en el cariotipo y de qué cromosoma se trata,
• determinar si está presente algún cromosoma translocado y qué cromosomas están envueltos en la translocación,
• permite la rápida identificación de material cromosómico de un cromosoma que haya sido insertado en otro cromosoma, y
• ayuda en gran manera a la identificación de cromosomas pequeños o fragmentados que frecuentemente implican el problema de averiguar de qué cromosoma son originarios