Prueba del indol

La prueba del indol es una prueba bioquímica realizada en especies bacterianas para determinar la habilidad del organismo de romper el indol del aminoácido triptófano. Esta división molecular es lograda por una serie de enzimas intracelulares diferentes, un sistema que en conjunto se le llama con frecuencia triptofanasa.

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Bioquímica

Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la molécula intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación, durante el cual se remueve el grupo amino (NH₂) de la molécula de triptófano. Los productos finales de la reacción son el indol, ácido pirúvico, amoníaco (NH₃) y energía. Como coenzima de la reacción se requiere al fosfato de piridoxal.

Procedimiento

Tal como ocurre con muchas pruebas bioquímicas, los resultados de una prueba de indol se indican con el cambio de color que sigue a la reacción. El cultivo bacteriano puro debe ser sembrado en un caldo con triptofano o peptona estériles o ambos por 24 a 48 horas antes de realizar la prueba. Luego de la incubación, se añaden cinco gotas de reactivo Kovac (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado al caldo del cultivo.

Una variante de la prueba se realiza usando el reactivo de Ehrlich's (usando alcohol etílico en lugar del alcohol isoamilo, desarrollado por Paul Ehrlich), en especial si se tiene un organismo que no sea fermentador y en organismo anaeróbico.

Los resultados positivos se muestran por la presencia de un color rojo o rojo-violeta en la superficie de la capa de alcohol en el cultivo. Un resultado negativo se muestra amarillo. Un resultado variable puede ocurrir cuando se muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia de escatol, también conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la degradación del triptófano.

Bacteria indol positiva

Las bacterias que resultan indol positivas al romper el indol del triptófano, incluyen:

• Aeromonas hydrophilia, Aeromonas punctata,
• Bacillus alvei,
• La mayoría de los Citrobacter spp.,
• Edwardsiella spp.,
• Escherichia coli,
• Flavobacterium spp.,
• Haemophilus influenzae,
• La mayoría de los Proteus spp. (más no el P. mirabilis),
• Plesiomonas shigelloides,
• Pasturella multocida, Pasturella pneumotropica, y
• Vibrio spp.

Bacteria indol negativa

Las bacterias que generan un indol negativo en esta prueba, incluyen:

• Actinobacillus spp.,
• Aeromonas salmonicida,
• Alcaligenes spp.,
• La mayoría de los Bacillus spp.,
• Bordtella spp.,
• Enterobacter spp.,
• La mayoría de los Haemophilus spp.,
• La mayoría de los Klebsiella spp.,
• Neisseria spp.,
• Pasturella haemolytica, Pasturella ureae,
• Proteus mirabilis,
• Pseudomonas spp.,
• Salmonella spp.,
• Serratia spp.,
• Yersinia spp.

Referencias

• MacFaddin, Jean F. "Biochemical Tests for Indentification of Medical Bacteria." Williams & Wilkins, 1980, pp 173 - 183.
• Ejemplo de una reacción típica de indol