Test de Ames

El test de Ames es un ensayo biológico para evaluar el potencial mutagénico de compuestos químicos. Como el cáncer está vinculado a menudo con el daño de el ADN, la prueba también sirve como un ensayo rápido para estimar el potencial cancerígeno de un compuesto, ya que las pruebas estándar para la carcinogenicidad hecho sobre roedores toman años para completar y son caras de hacer. El procedimiento se describe en una serie de documentos de principios del decenio de 1970 por Bruce Ames y su grupo en la Universidad de California, Berkeley

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Procedimiento general

La prueba utiliza varias cepas de la bacteria Salmonella typhimuriumque llevan mutaciones en genes implicados en la síntesis de histidina, por lo que requieren histidina para el crecimiento. La variable está poniendo a prueba la capacidad del mutágeno para provocar un retorno al crecimiento en un histidina libre de soporte. Las cepas del probador están especialmente construidas para tener una Mutación con cambio puntual en los genes necesarios para sintetizar histidina, que permite la detección de mutágenos que actúan a través de diferentes mecanismos. Algunos compuestos son muy específicos, causando reversiones en sólo uno o dos cepas.^[1] El probador de cepas también lleva mutaciones en los genes responsables de la síntesis del lipopolisacárido, haciendo que la pared celular de las bacterias más permeable,^[2] y en la supresión reparan el sistema para hacer la prueba más sensible.^[3] Extracto de hígado de rata se añade para simular el efecto de metabolismo, ya que algunos compuestos, como el benzopireno, no son mutagénicas, pero sí los son sus productos metabólicos.^[4]

Las bacterias se extienden sobre una placa de agar con una pequeña cantidad de histidina. Esta pequeña cantidad de histidina en el medio de cultivo permite a las bacterias crecer por un tiempo inicial y tener la oportunidad de mutar. Cuando la histidina se agota sólo las bacterias que han mutado para obtener la capacidad de producir su propia histidina va a sobrevivir. La placa se incuba durante 48 horas. La mutagenicidad de una sustancia es proporcional al número de colonias observadas.

Problemas

Como la Salmonella es una Célula procariota, no es un modelo perfecto para los seres humanos. Un adaptado modelo in vitro se ha hecho con las células Célula eucariota, por ejemplo la estructura de levadura.

Referencias

1. ↑ Bruce N. Ames, E. G. Gurney, James A. Miller, and H. Bartsch (1973). "Carcinogens as Frameshift Mutagens: Metabolites and Derivatives of 2-acetylaminofluorene and other Aromatic Amine Carcinogens". PNAS 69: 3128-2132.
2. ↑ Bruce N. Ames, Frank D. Lee, and William E. Durston (1973). "An Improved Bacterial Test System for the Detection and Classification of Mutagens and Carcinogens". PNAS 70: 782-6.
3. ↑ Joyce McCann, Neil E. Spingarn, Joan Kobori, and Bruce N. Ames (1975). "Detection of Carcinogens as Mutagens: Bacterial Tester Strains with R Factor Plasmids". PNAS 72: 979-83.
4. ↑ Bruce N. Ames, William E. Durston, Edith Yamasaki, and Frank D. Lee (1973). "Carcinogens are Mutagens: A Simple Test System Combining Liver Homogenates for Activation and Bacteria for Detection". PNAS 70: 2281-5.