esp  
DeutschEnglishFrançaisEspañol

Tinción de Ziehl Neelsen



  La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, que se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. La tinición fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 to 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patólogo.

Tabla de contenidos

Técnica

Hay dos variantes de esta técnica, la llamada "en caliente" y "en frío" o de Kinyoun y se siguen los siguiente pasos

Variante clásica o "en caliente"

  1. Hacer un frotis de la muestra de esputo.
    1. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinición.
    2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tinción con los extendidos hacia arriba. Coloque todos los portaobjetos orientados uniformemente, con el frotis hacia arriba. Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez.
  2. Dejar el frotis sobre el puente de tinción.
  3. Aplicar fucsina-fenicada.
    1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este período.
  4. Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos).
    1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante.
    2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua.
  5. Decolorar con alcohol-ácido.
    1. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante, tal como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 3 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teñido. Enjuague con agua una vez más los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los portaobjetos aún están rosa, aplique una cantidad adicional de la solución decolorante de 1 a 3 minutos.
  6. Aplicar azul de metileno (1 minuto).
    1. Aplique la solución de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
  7. Enjuagar con agua
    1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
    2. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 10 x 100

Variante de Kinyoun o en "frío"

  1. Hacer un frotis.
  2. Dejarlo en el puente de tinción.
  3. Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).
  4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
  5. Decolorar con alcohol acido.
  6. Lavar con agua del grifo.
  7. Contrastar con azul de metileno

Utilidad

Ayuda a la identificación de microorganismos patógenos como por ejemplo: Mycobacterium tuberculosis que provoca la enfermedad de la tuberculosis.

Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes

Otros tipos de tinción

  • Tinción de Gram
  • tinción ácido - alcohol resistente
  • tinción de esporas
  • tinción negativa

Referencias

  1. ↑ SEBHATU, Mineab, KIFLOM, Bahlbi, SEYOUM, Melles et al. Determining the burden of tuberculosis in Eritrea: a new approach. Bull World Health Organ [online]. 2007, vol. 85, no. 8 [cited 2007-11-08], pp. 593-599. Available from: [1]. ISSN 0042-9686.
  2. ↑ LANIADO-LABORIN, Rafael and CABRALES-VARGAS, Noemí. A positive sputum smear test is not always indicative of pulmonary TB: Another reason to order routine cultures. Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. [online]. 2005, vol. 18, no. 4 [cited 2007-11-08], pp. 286-289. Available from: [2]. ISSN 0187-7585.
  3. ↑ ROSILÉIA M. DE QUADROS. Detection of Cryptosporidium oocysts by auramine and Ziehl Neelsen staining methods. Parasitol Latinoam 61: 117 - 120, 2006. [3]
  • Baciloscopía directa de BAAR Association of Public Health Laboratories / Centers for Disease Control and Prevention.
 
Este articulo se basa en el articulo Tinción_de_Ziehl_Neelsen publicado en la enciclopedia libre de Wikipedia. El contenido está disponible bajo los términos de la Licencia de GNU Free Documentation License. Véase también en Wikipedia para obtener una lista de autores.
Su navegador no está actualizado. Microsoft Internet Explorer 6.0 no es compatible con algunas de las funciones de Chemie.DE.